三分鐘，帶你了解色譜！

色譜的由來

   色譜法是一種重要的分離分析方法，它是根據不同物質在固定相和流動相中具有不同的分配系統或吸附系數而實現分離。

   1903年，植物學家Tswett茨維特提出了一種分離現象，他利用石油醚提取植物中的葉綠素，將碳酸鈣裝入玻璃柱管中，然后把葉綠素的石油醚提取液倒入玻璃柱中，再利用純的石油醚進行淋洗，這樣不同的色素按吸附順序在玻璃管內形成相應的彩色環帶，后來稱為“色譜圖”。

色譜的分類

   按兩相的物理狀態可分為：氣相色譜法(GC)和液相色譜法(LC)。氣相色譜法適用于分離揮發性化合物。GC 根據固定相不同又可分為氣固色譜法(GSC)和氣液色譜法(GLC)，其中以 GLC 應用廣泛。液相色譜法適用于分離低揮發性或非揮發性、熱穩定性差的物質。LC同樣可分為液固色譜法(LSC)和液液色譜法(LLC)。此外還有超臨界流體色譜法(SFC)，它以超臨界流體（界于氣體和液體之間的一種物相）為流動相（常用 CO2），因其擴散系數大，能很快達到平衡，故分析時間短，特別適用于手性化合物的拆分。

   按原理分為吸附色譜法(AC)、分配色譜法(DC)、離子交換色譜法(IEC)、排阻色譜法(EC，又稱分子篩、凝膠過濾(GFC)、凝膠滲透色譜法(GPC）和親和色譜法，此外還有電泳。按操作形式可分為紙色譜法(PC)、薄層色譜法(TLC)、柱色譜法。

色譜法的原理

   色譜法的分離原理是：溶于流動相中的各組分經過固定相時，由于與固定相(stationary phase)發生作用（吸附、分配、離子吸引、排阻、親和）的大小、強弱不同，在固定相中滯留時間不同，從而先后從固定相中流出。又稱為色層法、層析法。

色譜的發展及應用

   液相色譜法開始階段是用大直徑的玻璃管柱在室溫和常壓下用液位差輸送流動相，稱為經典液相色譜法，此方法柱效低、時間長（常有幾個小時）。

   高效液相色譜法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在經典液相色譜法的基礎上，于 60 年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發展起來的。它與經典液相色譜法的區別是填料顆粒小而均勻，小顆粒具有高柱效，但會引起高阻力，需用高壓輸送流動相，故又稱高壓液相色譜法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC)。又因分析速度快而稱為高速液相色譜法(High Speed Liquid Chromatography，HSLP)。也稱現代液相色譜。

HPLC的優點

   高效液相色譜儀（HPLC）作為有機化學分析的重要手段之一。被廣泛用于合成化學、石油化學、生命科學、臨床化學、藥物研究、環境監測、食品檢驗及法學檢驗等領域。具有以下優點：

  （1）分辨率高于其它色譜法

  （2）速度快，十幾分鐘到幾十分鐘可完成；

  （3）重復性高；

  （4）高效相色譜柱可反復使用；

  （5）自動化操作，分析精度高。